Nat. Biotechnol. | 枝状化学修饰poly(A)尾提升mRNA翻译

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分享一篇发表在Nature Biotechnology上的文章,文章的题目是“Branched chemically modified poly(A) tails enhance the translation capacity of mRNA”,通讯作者是来自美国麻省理工化学系的王潇助理教授,其研究方向是开发和应用新的化学,生物物理和基因组工具,以更好地了解组织功能和障碍的分子机制。

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信使mRNA由于其可编程、可扩展和易于设计合成等特性,被用于酶替代、抗体治疗和基因编辑等疗法,但是传统的mRNA药物存在不稳定、表达效率低等问题,可能需要导致细胞毒性的高剂量。为了解决这一难题,研究者致力于提高mRNA翻译的持续时间和整体蛋白表达量。现有的mRNA疗法由于受到3’端外切酶介导的降解,半衰期较短,此前研究者设计环状RNA试图规避降解,但其依赖内部核糖体进入位点介导翻译,因此翻译效率较低;且由于非天然核糖核酸会影响二级结构,从而抑制反向剪切环化,因此无法可控引入化学修饰,而自我复制mRNA也存在低效且免疫原性的问题,因此研究者致力于开发保留5’端帽结构的策略。
mRNA翻译依赖于5’端帽结构和3’端 poly(A)尾。其中真核翻译起始因子eIFs识别mRNA的5’端帽结构形成翻译起始复合体,而PABP蛋白识别mRNA的poly(A)尾,并与5’端起始复合体相互作用形成伪环状结构从而高效地产生蛋白,其不仅通过招募转录起始因子起始翻译,同时可以稳定mRNA结构。该课题组此前用T4 RNA连接酶在poly(A)尾部位点特异性地引入具有核酸外切酶抗性的化学修饰,显著提高了mRNA的稳定性。由于PABP蛋白常以多聚体结合poly(A)尾,作者猜测通过引入多条末端修饰的poly(A)尾或可以更好的保护其不被降解,从而提升翻译效率。
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由此,作者设计合成了带帽的化学修饰枝状寡聚核糖核酸,先合成带有叠氮或炔基的寡聚核糖核酸,后续利用铜催化的点击化学反应产生枝状结构,通过高效液相色谱提纯后,用T4 RNA连接酶将其接入体外转录合成的全长mRNA。通过mRNA编码的荧光素酶测试,作者发现带有三条枝状结构的poly(A)可在HeLa细胞内产生明显提高的荧光信号。后续作者利用此体系向小鼠中递送Cas9蛋白,成功实现了较高的基因敲除效率。
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为了解析机制,作者使用了该课题组研发的空间原位RNA检测方法STARmap来检测整体RNA数量,RIBOmap来检测被核糖体结合的RNA数量,以比值来计算相对翻译效率。作者发现随着时间增加,带有多条poly(A)尾和化学修饰的mRNA具有更高的翻译效率,在小鼠内也观察到同样的趋势。
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总之,此文章通过引入枝状化学修饰poly(A)尾,增强了mRNA的翻译能力和蛋白质表达水平。作者展示了此技术在小鼠肝脏中的高效基因组编辑能力,为mRNA疗法的发展提供了新的思路。
本文作者:LJF
责任编辑:LYC
原文链接:https://doi.org/10.1038/s41587-024-02174-7
文章引用:10.1038/s41587-024-02174-7

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