对于大部分的实验检测，化学标记法通常就足以满足需求。无论是购买商品化的蛋白，还是实验室表达的特殊蛋白，用简单的化学试剂就能将蛋白标记上生物素，即可用于后续检测。

1.标记蛋白质氨基的活化生物素：NHS-Biotin和Sulfo-NHS-Biotin；NHS-LC-Biotin and Sulfo-NHS-LC-Biotin；NHS-Iminobiotin

2.标记蛋白质巯基的活化生物素：Biotin -BMCC，Biotin-HPDP ，Iodoacetyl-LC-Biotin  

3.标记蛋白质羰基或羧基的活化生物素：Biotin-Hydrazide and Biotin-LC-Hydrazide ，Biocytin Hydrazide 

4.其他类型活化生物素： Photobiotin ，Biotinyl- L -3-(2-naphthyl)-alanine hydrazide，Biotin-PEG-Phosphine

生物素标记化合物的基本设计如下图所示，所有这些修饰试剂的共同之处在于结构的一端存在双环生物素环，而另一端存在可用于与其他分子偶联的反应基团。

在选择所需试剂时，不仅需考虑到偶联所用的基团，还需考虑所用试剂的水溶性，并选择合适的溶剂对其进行溶解。此外，当偶联的样品活性受到影响时，可以考虑空间桥联臂的影响，增加间隔臂可以使偶联物更容易接近生物素，与链霉亲和素的相互作用可能会提高5倍。在选择生物素化试剂时，另一个需要考虑的变量是其结合能力，例如与天然生物素相比，亚胺生物素与亲和素结合能力更弱，如果需要再次将两者分离，那么使用亚胺生物素需要的条就更为温和。

NHS-Biotin，中文名称：生物素-N-琥珀酰亚胺基酯（Smart货号SLR00101），分子式：C14H19N3O5S，分子量：341.38，化学结构式如下：

基本的标记步骤为：

1.称取2mg NHS-Biotin，加入590µl DMSO，混合均匀，现配现用。2.将需要活化的抗体溶于1ml 1XPBS中，一般浓度为2mg/ml的抗体加入溶解好的活化试剂26.6µl（可根据样品浓度适当增减），混合均匀，室温孵育30min或4度2h。3.采用脱盐柱脱盐或透析去除未反应的活化试剂。

1.依据抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件。

2.标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例。

3.为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构。

4.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，尽量不影响后者的免疫活性。

根据以上对化学法的介绍，我们对两种标记方法的优缺点进行一个比较，大家可以根据实际情况进行选择。

生物素标签纯化和检测产品：

不论是Avi-tag定点标记生物素技术还是化学法，将抗体或者蛋白标记后，都需要用合适的介质对生物素化的蛋白进行纯化和检测，我们公司将链霉亲和素(Streptavidin)定点偶联于琼脂糖介质或者磁性微球上，形成了下面两款生物微球和一款预装柱产品：

具体应用包括：

1.生物素化蛋白的纯化

2. IP/Co-IP

用我们的Streptavidin Beads 6FF或者Streptavidin MagPoly Beads，结合生物素标记技术可以用于免疫沉淀。先将生物素化的抗体与我们的微球结合，然后用结合了抗体的微球去捕获细胞裂解上清中的抗原，洗脱时抗原脱落。

此外，Streptavidin Beads 6FF或者Streptavidin MagPoly Beads还可以用于纯化生物素化核酸，应用于下游实验，包括制备单链 DNA 模板，分离 RNA 和 DNA 结合蛋白，固定大 DNA 片段，纯化测序产物以及特异性捕获核酸等等。