最新发表在JACS上来自于Bertozzi CR的文章“Glyco-seek: Ultrasensitive Detection of Protein-Specific Glycosylation by Proximity Ligation PCR.”

 O-GlcNAcylation一种非常重要的蛋白翻译后修饰，目前发现在真核蛋白质组上有三千多个修饰位点。而目前传统检测感兴趣蛋白上O-GlcNAc修饰水平的方法，例如IP后抗体检测等，都存在检测灵敏度低和样品损失大等问题。这篇文章中，作者开发了一个叫做Glyco-seek的方法，可以实现对低丰度O-GlcNAc修饰的超灵敏检测。作者通过化学酶法在蛋白O-GlcNAc修饰上连接上生物素修饰，实现对O-GlcNAc修饰的特异性标记。然后作者将近年来广泛应用的proximity ligation assay (PLA)技术应用于检测特定蛋白上的O-GlcNAc修饰水平。简单地说，该蛋白的特异性抗体上偶联的DNA单链与生物素抗体偶联的DNA单链在DNA连接酶的作用下与设计的互补连接DNA链形成双链DNA，然后再通过常规的qPCR技术对信号进行放大和定量检测。作者发现这种方法的检测限远远高于传统的western blot的方法，说明了该方法的高效性。这篇文章通过结合化学酶法特异标记和PLA技术，实现了对O-GlcNAc修饰水平和动态变化的定量检测。

原文链接：http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jacs.6b03861

参考文献：DOI: 10.1021/jacs.6b03861